产品名称 | 货号 | 包装规格 | 单位 | 目录价 |
Lipo2000转染试剂 | DIB034-0.75ml | 0.75ml | 支 | 2400 |
Lipo2000转染试剂 | DIB034-1.5ml | 1.5ml | 支 | 3600 |
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Lipo2000转染试剂
产品编号:DIB034-1.5ml DIB034-0.75ml
产品规格:1.5ml 0.75ml
保存:2-4℃保存一年。(避免冷冻)
产品说明:
Data Invention Biotech *有**配方Lipo2000转染效率介于Lip2000和Lip3000之间,毒性更低,转染效率更高,是一种新型的阳离子脂质体转染试剂。适合于将核酸(DNA和RNA)转染入真核细胞,具有低细胞毒性;对多种类型的细胞和培养板都具有高转染效率;转染时血清的存在不影响转染效率的优点。
适用范围:贴壁细胞和悬浮细胞(哺乳动物细胞系)的转染。
质粒DNA的转染:对大多数细胞来说,DNA(µg)与Lipo2000 (µl)的比例为1:2~1:3。转染时高的细胞密度可以得到高的转染效率和表达水平,并能减少细胞毒性。
1. 以24孔板为例
贴壁细胞: 转染**天,用500 µl不含抗生素的培养基接种0.5~2×105细胞,使之第二天能达到70-90%汇合。
悬浮细胞:在准备DNA-Lip2000复合物之前,用500 µl不含抗生素的培养基接种4~8×105细胞即可。
2. 对每个转染样品,进行以下操作
a. 在eppendorf管里分别加入50 µl Opti-MEM I ReLipced Serum Medium和0.8 µg DNA轻柔混匀,制成DNA稀释液。
b. 在另一个eppendorf管里分别加入50µl Opti-MEMI ReLipced Serum Medium和2.0 µl Lipo2000(注意用前先混匀),轻柔混匀,制 成Lip2000 稀释液,室温静置5分钟。
c. 将DNA稀释液和Lip2000稀释液混合,轻柔混匀,室温静置20分钟, 形成DNA-Lip2000复合物。DNA-Lip2000复合物在室温下可稳定存在6小时。
3. 将DNA-Lip2000复合物加入到接种好的细胞中,将培养板轻轻地前后摇动,使复合物分散均匀。
4. 在37℃ CO2培养箱中培养4-6小时后更换培养基,继续培养18~48小时。
5. 如果要筛选稳定细胞株,则在转染24小时后将细胞按照1:10或更高的比例接种到新鲜培养基中,第二天加 入选择性培养基进行筛选。
质粒DNA转染的优化 为达到较高的转染效率和降低细胞毒性的影响,可以对DNA和Lip2000的比例以及细胞密度进行优化,一 般在1:0.5~1:5的范围内优化DNA (µg)和Lip2000 (µl) 的比例。
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